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河豚毒素的制取方法
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随着大量研究成果的问世,水生生物中提取出来的保健功能食品和药物的品种数量不断增加,水产药物及保健食品的研制成为一个年轻而重要的研究领域,它涉及到生物学、生物化学、医药学、分子生物学、遗传学等多种学科。在我国还融合进独特的中华医药文化,研制开发了不少水产保健品和药物方面的新型产品。
河豚毒素是一种弱碱性动物生物碱,成品为白色的结晶状固体,它是一种效果极好且不会上瘾的镇痛剂,在国际市场上卖价很高,甚至贵过黄金。
一、工艺流程
河豚卵巢→水提取→除蛋白质→离子交换→脱色→活性炭吸附→浓缩→精制→结晶
二、操作要点
1.原料:取新鲜河豚鱼卵巢,如不及时使用可保存在福尔马林溶液中,卵巢需磨碎才能加工。
2.提取:碎卵巢加水浸泡4天,过滤后,再加水泡1天。反复三次,三次滤液合并,浸泡时需在0--5℃低温下进行。
3.除蛋白质:滤液中有许多水溶性蛋白质需去除,可用加热法处理。将滤液加热至沸,并维持10分钟,使蛋白质产生热变性析出滤去,取滤液。
4.离子交换:要提纯毒素,需用离子交换方法将一些杂质去除,河豚毒素带正离子,所以可用弱酸性阳离子交换树脂进行交换,当树脂交换饱和后(用小白鼠跟踪进行毒性测定),停止上柱,分别用水及10%醋酸洗脱交换柱,并分别收集洗脱液。
5.脱色:洗脱液毒性已很强,但色泽较深,需脱色处理。用醋酸调节洗脱液的pH至4--6,加3%活性炭,加热至80℃,然后过滤,得无色澄清滤液。
6.吸附:为了得到更纯的毒素,需进一步提纯。用硬脂酸减活处理后的活性炭柱将毒液吸附(滤液需用8%氨水调节pH至9),吸附饱和后再用含0.5%醋酸的20%乙醇溶液洗脱,洗脱至最后洗脱液无毒为上,收集洗脱液。
7.浓缩:洗脱液于70℃以下减压浓缩,蒸发去除水分和乙醇,此时液体呈淡黄色油状。
8.粗品:用5%醋酸溶液,再用8%氨水调:节pH至9,并放置在低温处24小时,析出的白色固体即为河豚毒素粗品。
9.结晶:如想继续提取精品结晶,则将上道工序反复进行溶解、沉淀,几次后再将析出的沉淀加等量苦味酸混合,加入少量水加热溶解、过滤,低温析出结晶,此工序也要反复3--4次,才能得到较纯的结晶状河豚毒苦味酸盐,将此产品加热水溶解,并滴人10%氨水调pH至9,冷却、结晶、洗涤,再加10%醋酸溶解,用氨水调pH,直至结晶析出。最后将晶体干燥,得到纯品。

 
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